導入
| ヨウ化プロピジウム | ||
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| 一般的な | ||
| IUPAC名 | ||
| CAS番号 | 25535-16-4 | |
| No.EINECS | 247-081-0 | |
| パブケム | 424898 | |
| 笑顔 | ||
| インチチ | ||
| 外観 | 固体: 濃い赤色; 溶液中: 暗赤色 濃度に応じてオレンジ色になります。 | |
| 化学的性質 | ||
| 生のフォーミュラ | C 27 H 34 I 2 N 4 | |
| モル質量 | 668.3946 ± 0.0248 g mol -1 | |
| 物理的性質 | ||
| 融解温度 | 210 ～ 230 ℃ （分解） | |
| 光学特性 | ||
| 蛍光 | λ励起305 nmおよび538 nm ; 発光波長617nm | |
| 予防 | ||
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| Rフレーズ： 36/37/38、 | ||
| Sフレーズ： 26、 | ||
| 生態毒性学 | ||
| DL | 16 mg・kg -1 (マウス、皮下注射) | |
ヨウ化プロピジウム(ヨウ化プロピジウムの IP または PI) は、核酸 (DNA または RNA) の挿入剤であり、分子量 668.403 Da の蛍光分子です。 IP は、膜の完全性 (壊死の特徴的な現象) を失った細胞の核をマークするための DNA マーカーとして一般的に使用されます。
分子生物学での使用
臭化エチジウム (BEt) と同様、ヨウ化プロピジウム (PI) は核酸のマーカーとして使用されるインターカレーション剤です。これは、配列特異性がほとんどまたはまったくなく、4 ～ 5 塩基対ごとに 1 分子という化学量論に従って DNA 塩基に結合します。 IP は RNA にも結合しますが、DNA を分解して偽陽性を避けるためにヌクレアーゼ (DNase) を使用した処理が必要になります。さらに、核酸に結合するIP 分子は、溶液中の遊離分子よりも 20 ～ 30 倍蛍光性が高く、最大励起は赤色方向に約 30 ～ 40 nmシフトし、最大発光は青色方向に約15 nmシフトします。 IP は、細胞イメージング(蛍光顕微鏡、共焦点顕微鏡)、フローサイトメトリー、さらには蛍光測定でも使用されます。
主に細胞イメージングやフローサイトメトリーで使用されるのは、その相対的な疎油性によって説明されます。実際、細胞膜を比較的容易に通過する能力を持つ臭化エチジウムとは異なり、2 番目の第 4 級アンモニウムを含む IP は比較的高い疎油性 (または親水性) を持っています。これにより、IP は細胞の生存能力の強力なマーカーになります。実際、生存可能な細胞は膜の完全性を持ち、IP は細胞内に存在する DNA に浸透して結合することができません。これは、死んだ細胞の透過性膜が細胞内に侵入できるのとは異なります。 DNAに結合するIP。さらに、IP は他の蛍光マーカーと並行して使用できます (マルチ標識技術)。したがって、IP は、抗体による直接的または間接的なマーキング、 in situハイブリダイゼーションによるマーキング、さらには細胞構造に特異的な蛍光色素を使用したマーキングと互換性があります。
ネクローシスおよびアポトーシス現象の検出
フローサイトメトリーでは、IP を使用すると、生細胞と死細胞を簡単に区別できます。しかし、死んだ細胞の集団、壊死細胞の部分集団、およびアポトーシス細胞を区別することは可能です。これを行うには、2 番目の蛍光色素、つまり GFP に融合したアネキシンを使用して二重標識を実行する必要があります。このマーキングは、アポトーシス細胞内で起こる特徴的な現象、つまり細胞質膜の脂質層の反転に基づいています。この逆転により、ホスファチジルセリンなど、通常は存在しない修飾リン脂質が外部環境にさらされることになります。しかし、アネキシンは細胞シグナル伝達に関与する分子ファミリーであり、これらのホスファチジルセリンに結合する能力を持っています。したがって、GFP に融合したアネキシンを使用すると、アポトーシス細胞 (アネキシン 5 のみで標識) と壊死細胞 (アネキシンで標識および IP で標識) を区別することができます。
植物の細胞壁の検出
植物生物学における IP の応用の 1 つは、細胞壁のマーキングに関するものです。実際、IP標識後、細胞の輪郭、観察された植物組織の壁内の細胞の周囲に残っているIPを観察することが可能です。例えば、シロイヌナズナの種子の根組織の細胞の輪郭を共焦点顕微鏡で観察することができます。目的の遺伝子が GFP をコードする遺伝子と融合していれば、根のどの部分でその遺伝子が発現できるかを正確に特定することが可能になります。